III Encuentro Uruguayo de Virología

La infección por el Virus Linfotrópico de Células T Humanas (HTLV) constituye un problema de salud global que afecta a entre 5 y 10 millones de personas, con una distribución endémica en varias regiones de Sudamérica. En Uruguay, el tamizaje obligatorio de donantes de sangre desde el año 2000 ha permitido identificar una prevalencia baja pero persistente (0,13% en 2012–2014; 0,14% en 2016; 0,19% en 2019), con mayor concentración en áreas fronterizas con Argentina y Brasil. Sin embargo, el país ha enfrentado limitaciones en el diagnóstico, el acceso a herramientas moleculares y el seguimiento clínico de los casos.

En 2022 se conformó un grupo multidisciplinario integrado por investigadores, técnicos y profesionales de la salud con el objetivo de abordar de forma coordinada esta infección en Uruguay. Entre las primeras acciones se destacan: la adaptación de un ensayo de RT-PCR múltiplex para la detección y diferenciación de HTLV-1 y HTLV-2, metodologías para cuantificación de carga proviral, y la secuenciación de muestras para caracterización genotípica. Estas iniciativas fortalecen la capacidad diagnóstica nacional y aportan herramientas fundamentales para la investigación epidemiológica.

Paralelamente, se busca establecer una policlínica especializada en HTLV en el Hospital de Clínicas, destinada al seguimiento de pacientes, la formación de profesionales y la generación de protocolos de atención específicos. Asimismo, se ha trabajado en campañas de sensibilización dirigidas al personal de la salud, buscando visibilizar una infección históricamente subestimada.

Este abordaje integral (que combina investigación básica, desarrollo tecnológico, interacción clínica y acciones de salud pública) constituye un paso decisivo hacia la consolidación de un sistema nacional de vigilancia y atención en HTLV. Uruguay se suma así a los esfuerzos regionales e internacionales por enfrentar una infección que, a pesar de su baja prevalencia local, plantea desafíos significativos en diagnóstico, equidad en salud y prevención.

Los virus oncolíticos forman parte de un cambio de paradigma en el tratamiento contra el cáncer, donde se aprovecha su capacidad inherente de infectar y replicarse preferentemente en células tumorales. Además de inducir lisis directa, estos virus modulan el microambiente tumoral y activan respuestas inmunes antitumorales al generar señales de peligro reconocidas por el sistema inmune. En este contexto, el virus Mayaro (MAYV), un alfavirus de ARN de cadena simple perteneciente a la familia Togaviridae, se presenta como un candidato oncolítico prometedor. Estudios previos de nuestro grupo mostraron que MAYV exhibe cinéticas de replicación variables entre líneas celulares derivadas de cáncer de pulmón y páncreas, sugiriendo que factores del hospedero podrían modular su replicación.
En el presente trabajo evaluamos dos aspectos críticos de la interacción virus-hospedero: la contribución del receptor de entrada y el papel de genes estimulados por interferón, con especial foco en la proteína antiviral de dedo de zinc ZAP. La expresión del receptor en la superficie celular fue cuantificado mediante Western blot y citometría de flujo en diferentes líneas celulares. Además, con el fin de evaluar la replicación viral independiente de la entrada, se realizaron ensayos de transfección con RNA viral y se midió la producción de títulos virales. Paralelamente, se evaluó la expresión de ZAP en función del tiempo de infección, para correlacionar su dinámica con la replicación viral, comparando con células ZAP knock-out.
Nuestros resultados preliminares indican que la disponibilidad del receptor no constituye un factor limitante para la replicación de MAYV en las líneas analizadas. En cambio, observamos una correlación inversa entre los niveles de ZAP y la producción viral, sugiriendo un rol regulador significativo de esta proteína en el control de la replicación de MAYV.

El virus de la hepatitis C (VHC) exhibe una alta variabilidad, tanto globalmente como dentro de los individuos infectados, donde existe como una población de variantes virales estrechamente relacionadas. La diversidad genética influye en la capacidad del virus para traducir sus proteínas, un paso clave en el ciclo viral. Si bien la literatura científica se ha enfocado, principalmente, en la manera en que las mutaciones en las regiones codificantes influyen en el fitness viral, existe un conocimiento limitado acerca de cómo la variabilidad intra-hospedero en las regiones no codificantes, específicamente en el sitio interno de entrada del ribosoma (IRES), afecta la eficiencia de la traducción.

Para abordar este aspecto escasamente explorado, se analizaron las variaciones en el IRES de pacientes con infección crónica por VHC y se estudió su impacto en la eficiencia traduccional. Con el propósito de reproducir las condiciones naturales de manera lo más precisa posible, se implementó una metodología que combina técnicas de secuenciación y experimentos de laboratorio. Este enfoque permitió estudiar el comportamiento de diversas variantes del IRES en cultivo celular, utilizando genomas virales completos.

Los resultados obtenidos evidencian no solo la presencia de interacciones epistáticas intragénicas a nivel del IRES, sino también que incluso pequeñas variaciones en dicha región pueden incidir significativamente en la traducción, con variantes de baja frecuencia que colectivamente influyen en la eficiencia global, particularmente en el genotipo 3 del VHC. Este estudio postula, por vez primera, que la población viral podría estar sujeta a un proceso de selección grupal a nivel de la traducción, en el cual la selección natural opera sobre los efectos combinados de diversas variantes más que sobre cada una de manera individual. Estos hallazgos son muy relevantes, puesto que proporcionan información acerca de mecanismos alternativos que podrían contribuir a la adaptación y persistencia viral en los pacientes.

Los Coronavirus generan una gran variedad de problemas sanitarios y económicos. En humanos, causan enfermedades respiratorias que pueden ir desde un resfriado común hasta cuadros graves. Un ejemplo es el SARS-CoV-2, responsable de la enfermedad por Coronavirus 2019 (COVID-19). Aunque se ha declarado el fin de la pandemia, el COVID-19 continúa siendo una preocupación vigente, especialmente por sus secuelas persistentes como la fatiga crónica y el deterioro cognitivo. Comprender los mecanismos moleculares y celulares de la infección por Coronavirus, así como los determinantes del hospedador durante la enfermedad, es clave para el desarrollo de estrategias efectivas de intervención. Previamente, a través del análisis transcriptómico de pacientes COVID-19 positivos, demostramos una desregulación de genes asociados a la respuesta de IFN-γ, correlacionada con la edad y la carga viral, posicionando a IFN-γ como mediador crítico en la defensa frente al SARS-CoV-2. En este trabajo nos proponemos evaluar el rol de la señalización de IFN-γ en la defensa del hospedador en un modelo murino preclínico de infección por Coronavirus. Para ello, ratones wild type (WT) e IFN-γ knockout (KO) fueron infectados con el virus de la hepatitis murina (MHV-A59) y, cinco días post-infección, evaluamos la carga viral en distintos órganos. Detectamos mayor carga viral en hígado, bazo, corazón y músculo de los ratones IFN-γ KO (p<0,05), mientras que en el cerebro se observaron niveles significativamente reducidos (p<0,01), especialmente en corteza prefrontal e hipocampo (p<0,05). Mediante análisis proteómico de muestras sanguíneas evidenciamos un enriquecimiento positivo de categorías asociadas a daño multiorgánico y uno negativo de vías vinculadas a enfermedades neurológicas y neuroinflamación en ausencia de IFN-γ. Estos resultados indican que IFN-γ modula el impacto multiorgánico de la infección, coordinando una respuesta antiviral que podría afectar negativamente al cerebro. Este estudio abre la posibilidad de desarrollar estrategias terapéuticas basadas en su modulación.

El virus del papiloma humano tipo 16 (HPV-16) es el principal agente viral asociado al cáncer cervicouterino a nivel mundial. Sus linajes presentan una fuerte estructura filogeográfica vinculada a los patrones migratorios humanos, lo que evidencia un proceso de coevolución virus-hospedador. Modelos filogeográficos sugieren que el HPV-16 surgió en África hace más de 100.000 años, diversificándose en linajes regionales. Entre ellos, el linaje D se habría originado hace unos 33.000 años en América, asociado a la expansión de poblaciones ancestrales (Zehender et al., 2016).
Estudios recientes muestran que el linaje D presenta una distribución preferente en América y, en menor medida, en Asia y Europa, con una prevalencia global cercana al 15% en hombres (Ferreira et al., 2021). Además, sus sublinajes D2 y D3 exhiben mayor frecuencia en adenocarcinomas cervicales y mayores tasas de integración viral al genoma humano, lo que refuerza su asociación a un mayor riesgo oncogénico (Clifford et al., 2019).
En este contexto, nuestro trabajo tuvo como objetivo el análisis filodinámico y filogeográfico del linaje D del HPV-16 (HPV-16 D) en Uruguay. A través de árboles de máxima credibilidad identificamos nodos clave que reflejan momentos y lugares de diversificación viral, mientras que los análisis demográficos bayesianos evidenciaron fases históricas de expansión y estabilidad en el tamaño poblacional efectivo del virus. Estos hallazgos sugieren que la dispersión del HPV-16 D estuvo marcada por eventos de migración viral vinculados tanto a la diversidad genética como a los movimientos poblacionales humanos.
Este constituye el primer estudio filodinámico y filogeográfico del HPV-16 realizado en Uruguay, aportando un marco pionero para la región y reforzando el valor de estas herramientas en la epidemiología molecular del HPV, con aplicaciones en la vigilancia genómica y en estrategias de prevención.

Las vacunas convencionales, como las de virus vivos atenuados o inactivados y las vacunas de subunidades, proporcionan una protección duradera contra diversas enfermedades peligrosas, aunque existen importantes obstáculos para su desarrollo contra patógenos con mayor capacidad de eludir la respuesta inmunitaria. Esto ha llevado a la necesidad de desarrollar plataformas tecnológicas que permitan el diseño y producción de vacunas más potentes y versátiles más rápidamente. Si bien hace décadas se trabaja en las vacunas a base de ARNm, esta tecnología ganó notoriedad debido a su destacado papel en la lucha contra el SARS-CoV-2, valiéndoles el premio Nobel en Medicina del 2023 a sus principales impulsores.

Nuestro objetivo es producir en Uruguay vacunas de ARN utilizando al virus Mayaro (MAYV) como modelo. MAYV es un arbovirus desatendido, detectado en humanos en el norte de Sudamérica, transmitido por mosquitos del género Aedes y es utilizado desde hace varios años en nuestro laboratorio para el estudio de la evolución viral.

Para lograr este objetivo diseñamos construcciones de ADN para evaluar el efecto de distintos parámetros en la eficiencia traduccional: 1) proteínas antigénicas, 2) uso de codones para la traducción en células humanas o murinas, y 3) regiones no traducidas. A partir de este ADN, se transcribió el ARNm in vitro utilizando nucleótidos modificados, un 5’-CAP y una cola de poli-A en el 3’. Los ensayos en cultivos celulares realizados con estos ARNs muestran la producción de la poliproteína estructural de MAYV, la cual es procesada para generar las glicoproteínas de superficie maduras. En el futuro, realizaremos la encapsulación de estos ARNm en nanopartículas lipídicas (LNP) y evaluaremos la inmunogenicidad de esta vacuna ARNm-LNP in vivo utilizando un modelo de ratón.

Una vez optimizada, esta estrategia podrá utilizarse para diseñar vacunas contra diversos patógenos relevantes para la salud humana y animal de nuestro país.

Introducción: El circovirus porcino tipo 2 (PCV2) es un patógeno de gran impacto en la producción porcina, cuya elevada tasa de mutación, a pesar de ser un virus con genoma ADN, ha favorecido la aparición de nuevos genotipos. Las partículas similares a virus (VLP), que imitan la estructura viral sin contener material genético, constituyen una plataforma vacunal segura y promisoria al inducir una respuesta inmunitaria humoral y celular.
Objetivos/Hipótesis: Este estudio tuvo como objetivo desarrollar un protocolo de producción de VLP de PCV2 en células de mamífero y optimizar su purificación mediante cromatografía, con la hipótesis de que esta estrategia permitiría obtener partículas de alta pureza, correctamente caracterizadas y con capacidad inmunogénica, representando una alternativa escalable a la ultracentrifugación.
Metodología: Se transfectaron células EXPI293F, evaluando parámetros de viabilidad, consumo de glucosa y producción de ácido láctico. Se prolongaron los cultivos a seis días. Las VLPs se purificaron mediante cromatografía de intercambio iónico y gel filtración. Posteriormente, se realizó su caracterización bioquímica y biofísica (Western blot, Dot blot, DLS y MET), así como la evaluación de la respuesta de anticuerpos mediante ELISA, en sueros de ratones inmunizados con las VLPs.
Resultados: Se obtuvieron VLPs de PCV2 estables, la estrategia cromatográfica permitió obtener partículas de alta pureza y con integridad estructural, confirmada por análisis bioquímicos y biofísicos. Además, de manera preliminar se probó que las VLPs son inmunogénicas.
Conclusión: El sistema EXPI293F permitió la producción eficiente de VLP de PCV2, y la optimización de la purificación cromatográfica proporcionó partículas puras, estables e inmunológicamente activas, consolidándose como un enfoque escalable para el desarrollo de vacunas veterinarias.

El virus de la leucemia bovina (VLB), es un deltaretrovirus oncogénico que infecta linfocitos B del ganado. Causa la leucosis bovina enzoótica, una enfermedad que afecta principalmente al ganado lechero y provoca importantes pérdidas económicas. No existen tratamientos ni vacunas aprobadas.
La retropeptidasa viral (PR-VLB) es esencial para su ciclo, ya que escinde la poliproteína Gag, dando lugar a la maduración y adquisición de capacidad infectiva de la partícula viral. La PR-VLB se produce como una versión extendida de Gag (Gag-pro/pol), debido a un cambio aleatorio en el marco de lectura. Para que la enzima sea activa requiere liberarse de las regiones flanqueantes (TF y P13).
En este proyecto, buscamos comprender el proceso de maduración de la PR-VLB, aún poco caracterizado, mediante el estudio del rol de TF y P13 en dicho mecanismo. Para ellos se generaron distintas variantes de la poliproteína Gag-Pro, incluyendo mutaciones en TF y P13, para ser expresadas en células HEK293T/CC81, y posteriormente analizarlos mediante western- blot con anticuerpos anti-cápside/proteasa. Hasta el momento hemos optimizado el protocolo de análisis para Gag-Pro, el cual utilizaremos para estudiar las demás construcciones.
Paralelamente, nos interesa también explorar la actividad inhibidora de una familia de compuestos denominada (metalo)carboranos sobre la PR-VLB.
Cribamos 32 compuestos pertenecientes a las familias de (metalo)carboranos, mediante ensayos de actividad enzimática en placas de 96 pocillos con PR-VLB recombinante y sustratos flurogénicos. Se identificaron ocho inhibidores (IC50~1uM) e interesantemente seis compuestos que potencian la actividad enzimática. Estamos caracterizando la actividad inhibibidora de estos compuestos bioquimica/biofisicamente, para luego estudiar cómo afectan el proceso de maduración y su potencial actividad antiviral.
Los resultados que iremos colectando será informativos para entender la biología del virus y pueden dar lugar a desarrollar compuesto con actividad antiviral.

El virus de la leucemia bovina (VLB) es un retrovirus oncogénico que causa leucosis bovina enzoótica (LBE), una enfermedad crónica que afecta mayoritariamente al ganado lechero, aunque se encuentra en aumento en bovinos de carne. La LBE genera pérdidas económicas relevantes en el sector, por su impacto en salud animal, productividad y comercio internacional. En Uruguay, la prevalencia en tambos supera el 80%, dificultando la aplicación de estrategias clásicas de control, por lo que el desarrollo de vacunas eficaces y seguras es crucial.

En este contexto nuestro grupo ha generado y caracterizado inmunógenos recombinantes del VLB en células S2 de Drosophila: incluyendo la glicoproteína de envoltura (Env-Soluble) y partículas similares al virus (VLPs). Estos inmunógenos fueron caracterizados demostrando una conservación en sus características estructurales y funcionales necesarias para un adecuado reconocimiento inmunológico lo que les confiere potencial para el desarrollo de vacunas.

El objetivo actual es avanzar en la optimización de su producción y purificación, así como en su caracterización bioquímica y biofísica, y evaluar su inmunogenicidad en un modelo murino.

En este marco, se produjeron lotes de la Env-Soluble con rendimientos de 10-14 mg/L, y se analizó el efecto de la remoción del tag de purificación sobre sus propiedades biofísicas y antigénicas.

Se compararon parámetros de crecimiento y viabilidad de células S2 en condiciones estáticas y con agitación, determinándose que el cultivo estático resulta más apropiado para el mantenimiento prolongado. Asimismo, se están haciendo pruebas en un biorreactor para células eucariotas donde se evaluó la citotoxicidad de distintos antiespumantes, sin detectarse efectos adversos sobre la viabilidad en las concentraciones probadas.

Estos avances constituyen un paso relevante hacia la caracterización integral de los inmunógenos y su futura evaluación de inmunogenicidad en modelo bovino.

La inmunosupresión en aves constituye un problema grave para la avicultura mundial, causada por diversos factores, incluidos patógenos que afectan órganos linfoides, comprometiendo productividad, resistencia a infecciones y eficacia de vacunas. Entre ellos destacan el virus de Gumboro (IBDV), el virus de la anemia infecciosa aviar (CAV) y el virus de la enfermedad de Marek (MDV). En Uruguay y la región, estos virus infectan aves de corral y coexisten frecuentemente. La situación epidemiológica regional es diversa: en Argentina y Brasil circulan variantes similares a las detectadas en Uruguay y otras con características diferentes, cuyo ingreso podría alterar el escenario nacional. Además, en Uruguay co-circulan cepas divergentes de estos virus, aumentando el riesgo de aparición de variantes recombinantes o reordenantes.
El objetivo de este trabajo fue desarrollar tres protocolos basados en multiplex PCR acoplada a secuenciación masiva para obtener de manera directa y económica los genomas completos de IBDV y CAV, así como regiones genómicas de MDV relacionadas con su potencial de virulencia.
Para cada virus se diseñaron cebadores quiméricos con adaptadores de Illumina que amplifican regiones de 200-300 pb con solapamientos, permitiendo reconstruir los genomas completos de IBDV y CAV y los genes Meq, pp38, vIL8 y gL de MDV. Los cebadores de cada virus se dividieron en dos pools y ambas multiplex-PCR se estandarizaron con cepas de campo divergentes y vacunales. Los productos de PCR se combinaron, indexaron y secuenciaron en MiniSeq Illumina. Obtuvimos las secuencias genómicas completas de IBDV y CAV y las secuencias genéticas de MDV para todas las cepas utilizadas. Estas metodologías permitieron caracterizar las cepas circulantes, comprender su evolución, analizar sus interacciones y contribuir al diseño de medidas de control más eficaces. Estas estrategias robustas, rápidas y económicas contribuirán a la vigilancia genómica de IBDV, CAV y MDV, proporcionando información relevante para la industria avícola.

La vigilancia de arbovirus en el Laboratorio de Referencia Nacional constituye un pilar fundamental para la detección temprana, caracterización y respuesta frente a las infecciones transmitidas por mosquitos en Uruguay y la región. En los últimos años, el país ha experimentado la circulación de virus como dengue y chikungunya, con brotes autóctonos que reflejan el impacto del cambio climático, la urbanización y la movilidad regional. El laboratorio cumple un rol central en el diagnóstico confirmatorio mediante técnicas moleculares y serológicas, en la caracterización genotípica de los virus circulantes, y en la integración de datos virológicos y epidemiológicos para orientar acciones de control. La implementación de herramientas de secuenciación de nueva generación ha permitido fortalecer la vigilancia genómica, identificar introducciones virales y analizar la dinámica de transmisión local y regional. Entre los desafíos actuales se destacan: 1) mantener la capacidad diagnóstica en períodos interepidémicos, 2) garantizar la calidad y oportunidad en el procesamiento de muestras durante picos epidémicos, 3) mantener la vigilancia molecular continua, 4) mejorar la articulación con la red de laboratorios periféricos y con el sistema de vigilancia epidemiológica, y 5) avanzar en la integración de la vigilancia de arbovirus con otros sistemas de virus emergentes bajo un enfoque “Una Salud”. Este panorama resalta la necesidad de fortalecer la capacidad nacional para la detección y respuesta oportuna frente a los arbovirus, en un contexto de creciente riesgo de reemergencia y expansión geográfica de estos patógenos.

En Uruguay, la circulación de alfavirus ha sido documentada desde la década de 1970, con reportes en humanos, equinos y mosquitos. En 2022, nuestro equipo fue el primero en reportar la presencia de dos alfavirus en murciélagos insectívoros: el virus Río Negro (RNV) y el virus de la Encefalitis Equina del Este (EEEV) linaje I, hallazgos que sirvieron de base para una investigación más profunda. En un esfuerzo integral para comprender la dinámica de estos virus, hemos analizado 363 muestras de hisopados orales y anales de 15 especies de murciélagos, confirmando que estos mamíferos pueden infectarse con ambos patógenos. El RNV fue detectado en siete especies diferentes, incluyendo murciélagos insectívoros y hematófagos, mientras que el EEEV se encontró en dos especies insectívoras. La detección de RNV en mosquitos cercanos a las colonias de murciélagos refuerza nuestra hipótesis sobre un ciclo de circulación viral complejo. Hipotetizamos que los murciélagos podrían actuar como hospedadores amplificadores (al igual que aves y roedores), manteniendo una circulación continua del virus, o como hospedadores finales ("dead-end hosts"), que se infectan sin ser capaces de transmitir el virus a otros vertebrados. Para dilucidar su rol, estamos realizando un enfoque integral que combina la vigilancia virológica y serológica en murciélagos, mosquitos, aves y roedores, junto con un modelado ecológico guiado por los datos de campo. Este enfoque permitirá evaluar diferentes modelos de circulación viral, contrastando parámetros como la prevalencia y la persistencia del virus en la población. La integración de estos datos de campo, laboratorio y modelización matemática no solo enriquecerá nuestro conocimiento sobre la epidemiología de los alfavirus en la región, sino que también proporcionará la información crucial necesaria para tomar decisiones de manejo informadas que equilibren la salud pública con la conservación de la fauna silvestre en Uruguay.

El estudio de las interacciones proteína–lípido es clave para entender procesos fisiopatológicos, pero en envolturas virales sigue siendo poco explorado debido a las limitaciones experimentales a escala nanométrica. Sin embargo, las simulaciones multiescala y de grano grueso ofrecen una vía con resolución cuasi-atomística y costo computacional moderado.
Aquí presentamos un pipeline de simulación optimizado para investigar la envoltura del virus del Zika (ZIKV). El flujo resuelve el empaquetamiento de membranas mediante mejoras y nuevas opciones en PACKMOL, permitiendo construir modelos con miles de lípidos en partículas tipo virus (VLP) en horas usando una sola CPU. El ensamblaje se integra en el marco multiescala del campo de fuerza SIRAH y, junto con un protocolo de equilibración robusto, habilita simulaciones de dinámica molecular (MD) de producción en GPUs ampliamente disponibles.
Las simulaciones revelan que la membrana del ZIKV experimenta presiones extremas y fuerzas asimétricas. Una red densa de contactos proteína–proteína genera regiones pobremente solvatadas, desestabiliza la monocapa externa y produce dinámica desacoplada entre monocapas. Estos resultados sugieren que la envoltura flaviviral almacena energía elástica significativa, potencialmente activa en la fusión de membranas.
La fidelidad con datos experimentales es alta: correlación >0,90 con mapas de densidad de crio-EM, y buen acuerdo en RMSD y factores B. Análisis estructurales detallados señalan un rol antes no descrito de fosfolípidos aniónicos en la estabilización de la envoltura.
Este pipeline generalizable aporta una base práctica para simular otros sistemas biomoleculares complejos y compartimentos subcelulares, acercando las simulaciones a escala de célula completa y ofreciendo herramientas ágiles para responder a enfermedades emergentes.

La infección por el virus del Dengue (DENV) es una de las arbovirosis más comunes en regiones tropicales y subtropicales, y constituye un importante problema de salud pública. En 2024, Uruguay registró un récord histórico de casos autóctonos (712) e importados (413), principalmente asociados a DENV-2. Las herramientas bioinformáticas resultan versátiles para analizar la relación patógeno-hospedero, incluyendo interacciones entre proteínas virales y receptores celulares.
El objetivo de este trabajo consistió en analizar in silico la interacción entre la glicoproteína E (gE) de cepas DENV-2 de circulación autóctona y receptores celulares humanos involucrados en el ciclo replicativo.
A partir de muestra de paciente agudo, la proteína gE de una cepa autóctona de DENV-2 se secuenció luego de PCR solapantes, se predijo la estructura secundaria y se modeló con AlphaFold. El modelo fue refinado con ModRefiner y validado computacionalmente. Las estructuras de DC-SIGN, L-SIGN, heparán sulfato y cepa de DENV-2 de referencia se obtuvieron del PDB. Se realizaron simulaciones de acoplamiento molecular mediante HADDOCK y ClusPro, seguido de análisis de interacción de los complejos gE-receptor, comparados con cepas reportadas.
Se obtuvo la secuencia completa de la cepa autóctona mediante secuenciación. El modelo tridimensional obtenido, luego del refinamiento mostró valores favorables de validación, con un 99% de aminoácidos en regiones favorables. El análisis de alineamiento estructural y acoplamiento molecular mediante diferentes herramientas muestra una capacidad diferencial de interacción, mediante número de miembros por clúster y puntajes de acoplamiento, donde se conservan las interfases de interacción, incluso con estructuras reportadas en el PDB para los receptores empleados.
Es el primer estudio de caracterización molecular y estructural que se lleva a cabo utilizando cepas uruguayas de DENV-2. Futuros estudios in vitro e in vivo son necesarios para determinar si estas cepas poseen diferencias que determinen cambios en tropismo y patogénesis del DENV circulante en Uruguay.

El virus Mayaro (MAYV) es un Alfavirus causante de un síndrome tipo-dengue y artralgias prolongadas, transmitido en zonas urbanas de Sudamérica por el mosquito Aedes aegypti. En 2019, la OPS emitió una alerta sobre este virus, sin embargo, la atención sanitaria se desvió posteriormente hacia la pandemia de COVID-19, relegando su atención. Esta situación muestra la necesidad de diseñar estrategias preventivas que permitan anticipar y controlar futuros brotes.

A diferencia de los arbovirus, los virus específicos de mosquitos presentan genomas con altas frecuencias relativas del dinucleótido CpG. Diversos estudios sugieren que incrementar esta frecuencia puede potenciar la respuesta inmune en hospedadores vertebrados.

En este trabajo utilizamos biología sintética e ingeniería genética para incrementar la frecuencia de CpGs en el genoma de MAYV mediante recodificación sinónima, con el fin de generar una vacuna de virus vivo atenuado. Se generaron tres mutantes con diferentes frecuencias de CpGs en: (1)toda la secuencia codificante, (2)exclusivamente la región no estructural, y (3)solamente la región estructural.

Estudios de cinética de replicación revelaron que estas mutaciones sinónimas generaron un fenotipo atenuado en células de mamífero inmunocompetentes, pero no en células de mosquito. Los mutantes presentaron una infectividad específica similar al virus wild-type, descartando artefactos de replicación y las modificaciones introducidas se mantuvieron tras 10 infecciones seriadas según secuenciación.

Estudios in vivo mostraron una atenuación significativa en órganos de ratones Balb/cJ, pero no en mosquitos Aedes aegypti. Se realizarán más ensayos en ratones, incluyendo desafíos con ratones preinmunizados.

Nuestros mutantes de MAYV enriquecidos con CpGs son candidatos prometedores para vacunas vivas atenuadas. Esta estrategia de atenuación podría aplicarse a otros arbovirus, ofreciendo un enfoque innovador para desarrollar vacunas contra amenazas virales emergentes.

Los moluscos bivalvos representan una importante fuente de virus transmitidos por alimentos, especialmente cuando se consumen crudos o ligeramente cocidos. Desde 2017, nuestro grupo investiga esta temática, aportando hallazgos novedosos que refuerzan la necesidad de vigilancia activa. En un primer estudio en Isla Gama, Buenos Aires, en el año 2015, se analizaron 88 ostras Crassostrea gigas, detectándose norovirus (NoV) GII.4/Sydney2012 y rotavirus A (RVA). A partir de estas muestras se logró aislar una cepa infecciosa de RVA G8-P[1]-I2-R2-C2-M2-A3-N2-T6-E2-H3, no reportada previamente en el país, demostrando la capacidad infectiva del mismo. Posteriormente, en un muestreo realizado en Golfo Nuevo, Puerto Madryn, Chubut entre 2018 y 2023, se analizaron 348 moluscos bivalvos, confirmándose la presencia de múltiples virus entéricos. Adenovirus (AdV) (58,6 %) fue el más prevalente, seguido por NoV GII y RVA (12,4 %), Hepatitis E (5,3 %) y Hepatitis A (4,4 %). El análisis molecular permitió identificar los siguientes genotipos: HAV 1A; AdV A31; RVA G8P[1]; y NoV GII.4[P16]. Complementando estos estudios, se realizó la primera evaluación cuantitativa de riesgo microbiológico (QMRA) en moluscos bivalvos en Argentina. AdV y NoV GII presentaron los mayores riesgos asociados al consumo de ostras y mejillones crudos, con probabilidades anuales de infección que superaron ampliamente los umbrales de referencia de la OMS y la EPA. En conjunto, estos estudios aportan evidencia novedosa sobre la presencia de virus entéricos en ambientes y alimentos de nuestro país, subrayando la necesidad de fortalecer los programas de monitoreo viral, el tratamiento de aguas residuales y las recomendaciones de cocción, con el fin de reducir riesgos para la salud pública en la región.

La expansión de especies exóticas invasoras y los cambios en el uso del suelo generan comunidades de mamíferos simplificadas, con consecuencias directas en la dinámica de enfermedades infecciosas. En particular, los mesomamíferos cumplen un papel central como hospedadores y vectores de patógenos, por lo que su abundancia relativa y posición en las redes ecológicas pueden modificar de manera significativa el riesgo sanitario. En Uruguay, el ciervo axis (Axis axis) se ha consolidado como especie nodo en los ensambles de mamíferos medianos y grandes, pero otros mesomamíferos, como el jabalí (Sus scrofa) y el carpincho (Hydrochoerus hydrochaeris), también participan activamente en interacciones que median la transmisión de agentes infecciosos y potencian la exposición. Con más de 11000 noches/cámara y del análisis de fecas y de sangre en cuatro localidades con distintos grados de intervención antrópica, se registraron entre 9 y 15 especies por sitio y se construyeron redes de co-ocurrencia. Estas redes permiten identificar los vínculos entre especies, estimando métricas de centralidad (grado, fuerza, intermediación, cercanía) que evidencian qué nodos facilitan el contacto indirecto entre hospedadores. Se complementó el análisis con métricas de diversidad (números de Hill) y la detección molecular de patógenos de interés sanitario, como el virus de Hepatitis E (HEV) y Neospora caninum. Los resultados muestran que en sitios degradados y/o dominados por especies invasoras, la diversidad efectiva y la equitatividad disminuyen drásticamente, incrementando la prevalencia de infecciones (hasta 60%). En contraste, comunidades con mayor riqueza y equidad evidenciaron un efecto dilución, con menor exposición simultánea a múltiples patógenos. Estos hallazgos refuerzan que la biodiversidad funcional actúa como barrera natural frente a emergencias sanitarias, mientras que las invasiones biológicas y la degradación de hábitats potencian el riesgo epidemiológico. Reconocer el papel de los mesomamíferos como especies nodo resulta clave para comprender la relación entre conservación y riesgo sanitario.

Los Mimivirus son virus gigantes que, por su tamaño, pueden observarse al microscopio óptico. Durante años fueron confundidos con cocos Gram positivos hasta que en 2003 se identificaron como agentes virales y se describió a Acanthamoeba polyphaga mimivirus (APMV). Su complejidad genómica, con genes vinculados a funciones inéditas en la virosfera, transformó el paradigma de la virología. APMV fue el primer representante del género Mimivirus (familia Mimiviridae). Posteriormente, el muestreo sistemático de ambientes acuáticos permitió expandir esta familia y descubrir nuevas familias de virus gigantes con rasgos singulares. En Sudamérica, Megavirus chiliensis fue el primer aislado en Chile y Sambavirus en Brasil, pertenecientes al género Mimivirus, linajes C y A, respectivamente. En Uruguay, nuestro grupo aisló por primera vez un virus gigante a partir de agua del Arroyo Vizcaíno mediante co-cultivo con Acanthamoeba castellanii. La replicación fue confirmada por microscopía electrónica de transmisión, que evidenció factorías virales y partículas con morfología compatible con los Mimivirus previamente descritos en nuestro continente. El objetivo del presente trabajo fue caracterizar a nivel genómico el virus aislado. Tras la extracción de ADN y secuenciación masiva se obtuvo el genoma completo (1,195 Mpb). El ensamblaje mostró homología con Cotonvirus japonicus, especie reportada en 2021 en Japón y propuesta como representante de un nuevo género dentro de la familia Mimiviridae. Los análisis realizados revelaron divergencias suficientes para sostener la propuesta de una nueva especie dentro del género Cotonvirus. La anotación de ORFs permitió la predicción génica, el análisis filogenético de aminoacil-ARNt sintetasas y genes centrales del filo Nucleocytoviricota, así como la identificación de genes compartidos y exclusivos, y su análisis funcional. Estos resultados constituyen la primera evidencia de un virus gigante en Uruguay y respaldan el hallazgo de una nueva especie, aislada en un sitio paleontológico singular reconocido por albergar fósiles de la megafauna sudamericana.

El virus del distemper canino (Canine morbillivirus, CDV) y el parvovirus canino (Carnivore protoparvovirus 1, CPV) son de los principales patógenos virales que afectan a perros domésticos y numerosas especies carnívoros silvestres. CDV, de la familia Paramyxoviridae, es un virus de ARN monocatenario negativo (≈ 15,6 kb) que codifica seis proteínas estructurales y dos no estructurales. CPV, de la familia Parvoviridae, es un virus de ADN monocatenario negativo (≈ 5,3 kb) que codifica dos proteínas no estructurales y dos estructurales. En el marco de un sistema de vigilancia continua, y aplicando un esquema diagnóstico basado en Qpcr seguido de caracterización genómica mediante multiplex-PCR-NGS, reportamos por primera vez en Uruguay la detección y caracterización genómica simultánea de ambos virus en un zorro gris (Lycalopex gymnocercus). El análisis de las secuencias reveló que la cepa de CPV detectada pertenece a la variante CPV-2a del filogrupo Asia-1, circulante en la población canina doméstica uruguaya. Este hallazgo refleja el contacto entre ambas poblaciones y sugiere la existencia de flujo viral desde perros domésticos hacia fauna silvestre. En el caso de CDV, la cepa identificada corresponde al linaje Europa 1/Sudamérica 1, también presente en perros domésticos en Uruguay. Sin embargo, los análisis filogenéticos mostraron una posición basal para la cepa en fauna silvestre, lo que podría indicar un rol potencial de esta especie como reservorio de CDV. Este constituye el primer reporte documentado de confección de CDV y CPV en fauna silvestre en Uruguay, con implicancias relevantes para la epidemiología y la dinámica de transmisión de estos virus en la interfaz entre animales domésticos y vida silvestre. Nuestros resultados subrayan la importancia de la vigilancia genómica en tiempo real como herramienta para monitorear la circulación de patógenos en carnívoros silvestres y orientar estrategias de prevención y control bajo un enfoque One Health.

Los modelos dinámicos tienen múltiples aplicaciones en ecología de enfermedades infecciosas. Una poco explotada es el diseño de estrategias de monitoreo de patógenos, incluyendo la selección de muestras y el diseño espaciotemporal del muestreo. En Uruguay la vigilancia de rabia en especies silvestres ha sido fundamentalmente mediante diagnóstico por IFD en ejemplares con contacto con humanos o animales domésticos, o capturados en respuesta a focos de transmisión. Si bien es aceptado que la seropositividad es más frecuente que la presencia de virus detectable, aún durante los brotes, no existen estudios que comparen ambas técnicas y provean elementos de interpretación. En este trabajo utilizamos la simulación in-silico de transmisión de rabia en vampiros, para evaluar sistemas de vigilancia activa. Se corrió un modelo SEIR estocástico con demografía, durante 50 años con paso diario, en una metapoblación de 25 colonias. Se incorporaron estimaciones de campo para parámetros demográficos. Los parámetros de la infección se obtuvieron de bibliografía. Se compararon los resultados obtenidos por serología y por detección viral. En todas las colonias, la presencia de virus se da en forma de pulsos, con valores máximos en el entorno del 30% (sólo superados en colonias en donde se da colapso por mortalidad), y por períodos muy cortos. La seroprevalencia se mantiene siempre mayor a cero cuando hay circulación de virus en el sistema (aún fuera de los periodos de brote en la misma colonia), con un promedio en torno al 80%. No hay una relación lineal entre prevalencia y seroprevalencia. El uso de serología permite detectar la circulación viral en sistemas de colonias conectadas, aportando información no sólo de la colonia muestreada, sino de las colonias cercanas. Los valores esperados de prevalencia implican tamaños muestrales grandes para cada colonia y diseños temporalmente intensivos, mientras que muestreos oportunistas son informativos cuando se utiliza serología.

El Virus de la Diarrea Viral Bovina (BVDV) es un importante patógeno a nivel mundial, causando pérdidas económicas significativas al sector ganadero. BVDV es endémico en Uruguay, con una seroprevalencia >80% a nivel de predio.
Este trabajo resume diez años (2014-2024) de epidemiología molecular y evolución del BVDV en Uruguay. Se analizaron muestras de suero y tejido de terneros con diarrea, fetos abortados, vaquillonas de predios con antecedentes de abortos y animales con síntomas de enfermedad de las mucosas, y se analizaron mediante PCR con transcripción inversa y secuenciación.
El análisis de la región genómica 5’UTR/Npro del BVDV reveló que los subtipos 1a, 1e, 1i y 2b de BVDV circulan en el país. El BVDV-1a sigue siendo el subtipo más prevalente, seguido del BVDV-2b, cuya prevalencia ha ido en aumento. Estudios previos revelaron que el subtipo BVDV-1a se esta diversificando geograficamente en Uruguay. En este trabajo, estudios evolutivos realizados con la región genómica Npro mostraron que el subtipo BVDV-2b evoluciona a una tasa de sustitución de 6,09 x 10⁻⁴ sustituciones/sitio/año, ha sido introducido desde Brasil en seis eventos separados entre 1870 y 1928 y no muestra diversificación geográfica dentro de Uruguay.
Los resultados de este trabajo demuestran que el BVDV-1a y el BVDV-2b evolucionan de forma diferente en Uruguay. Esta divergencia evolutiva también es notable al compararla con los patrones observados en otros países donde circulan estos subtipos. Los hallazgos de este estudio proporcionan información crucial que debe considerarse para desarrollar medidas efectivas de control del BVDV en Uruguay.

La infección por el VLB representa un problema sanitario y económico en la producción lechera, dada su alta prevalencia en Uruguay y la ausencia de vacunas o tratamientos específicos. Este retrovirus del género Deltaretrovirus infecta linfocitos B y se mantiene en el hospedador de forma crónica, favoreciendo inmunosupresión, linfocitosis persistente y eventualmente linfomas. En este sentido, comprender los mecanismos moleculares que sostienen su replicación y diseminación resulta clave para diseñar estrategias de control.
En este trabajo se estudió la interacción entre proteínas virales y celulares, un aspecto fundamental de la biología de este virus mediante el cual modula procesos biológicos del hospedador. Se abordaron dos proteínas virales: Tax, un regulador clave con funciones oncogénicas, capaz de activar la transcripción viral y alterar vías de señalización; y la proteasa (PR), indispensable para la maduración viral. A través de aproximaciones complementarias, el análisis de posibles interactores y la evaluación del proteoma, se identificaron proteínas celulares asociadas a Tax y PR. En el caso de Tax, además de su vínculo con chaperonas y moduladores de señalización, se observó un enriquecimiento en proteínas relacionadas con la organización del citoesqueleto, el transporte intracelular y la dinámica de microtúbulos, sugiriendo que su acción no solo reprograma vías regulatorias sino que también impacta en la arquitectura y movilidad celular. Para PR, se destacan interactores ribosomales, metabólicos y del citoesqueleto, hallazgos que se ven reforzados por la validación experimental de la interacción con vimentina, lo que aporta evidencia de su probable rol en el transporte de complejos virales.
Los resultados indican que Tax remodela el citoesqueleto y la homeostasis celular favoreciendo la persistencia viral, mientras PR participa en funciones estructurales y de transporte. Estos resultados preliminares contribuyen al conocimiento de la biología del VLB y abre la posibilidad de identificar blancos celulares relevantes para futuras estrategias terapéuticas.

El viroma, entendido como el conjunto de genomas virales presentes en un tejido, constituye un componente aún poco explorado en la salud animal. En cerdos, la mayoría de los estudios sobre enfermedad respiratoria se han centrado en un número limitado de virus clásicamente asociados, como el virus del Síndrome Respiratorio y Reproductivo Porcino (PRRSV), el circovirus porcino tipo 2 (PCV2) y el virus de la influenza A porcina, mientras que el rol de otros agentes virales permanece en gran medida desconocido. La metagenómica ofrece la posibilidad de ampliar esta visión, permitiendo no solo caracterizar genomas completos, sino también identificar virus inesperados y coinfecciones que podrían contribuir al complejo respiratorio porcino (PRDC). En este estudio se analizó el viroma de cuatro pulmones de cerdos con sintomatología respiratoria, provenientes de granjas uruguayas con distintos sistemas productivos. Como primer paso, se aplicaron técnicas moleculares optimizadas en nuestro laboratorio para los virus clásicamente asociados al PRDC, confirmándose que cada pulmón era positivo para al menos uno de ellos. El objetivo fue obtener sus genomas completos y, al mismo tiempo, explorar la presencia de otros virus no rutinariamente identificados. El abordaje viromico, basado en enriquecimiento viral y secuenciación masiva, permitió recuperar los genomas completos de los virus esperados, incluyendo el primer genoma completo de PRRSV reportado en Sudamérica, y evidenció la presencia de PCV3, anellovirus, astrovirus, bocavirus, gemykibivirus y retrovirus endógenos. Sorprendentemente, se detectaron genomas completos de rotavirus (A, B, C y H), agentes causales principalmente de gastroenteritis y rara vez vinculados a tejido pulmonar. Estos hallazgos ponen de relieve la complejidad viral que subyace al PRDC y muestran que la metagenómica puede abrir nuevas perspectivas, no solo para comprender mejor el rol de los virus clásicamente asociados, sino también para revelar agentes no convencionales cuya contribución a la patogenia respiratoria porcina podría estar subestimada.

El parvovirus canino (CPV), especie Carnivore protoparvovirus 1 (familia Parvoviridae), es un virus pequeño, no envuelto, con un genoma de ADN monocatenario lineal (5,2 kb) de polaridad negativa, organizado en dos marcos abiertos de lectura. El ORF1 codifica las proteínas no estructurales (NS1/NS2), y el ORF2 codifica las proteínas de la cápside (VP1/VP2), siendo VP2 el principal determinante antigénico. CPV es el agente etiológico de la parvovirosis canina, una enfermedad de gran impacto sanitario que afecta tanto a perros domésticos como a diversas especies de carnívoros silvestres, caracterizada por gastritis hemorrágica y elevadas tasas de morbilidad y mortalidad. Actualmente co-circulan tres variantes antigénicas/genéticas, definidas por el residuo 426 de VP2 (Asn: CPV-2a; Asp: CPV-2b y Glu: CPV-2c). Sin embargo, esta tipificación basada en VP2 no refleja la clasificación filogenética inferida mediante secuencias genómicas parciales o completas, debido a mutaciones convergentes y eventos de recombinación. En este trabajo, analizamos de forma global la diversidad de CPV para inferir su origen reciente y delimitar filogrupos circulantes con identidad genética, geográfica y temporal, proponiendo un sistema de clasificación filogeográfica actualizado. Para ello, secuenciamos nuevos genomas completos (Sanger y secuenciación masiva Illumina), los integramos con bases de datos públicas (GenBank) y realizamos análisis filodinámicos. Se identificaron clados previamente descritos y nuevos filogrupos con señales de migración inter e intracontinental y diferenciación local. Este sistema de clasificación unificado mejora la trazabilidad de linajes, la vigilancia en tiempo real y la interpretación de patrones de evolución y diseminación que reflejan la diversidad actual de CPV.

Los adenovirus aviares (Familia Adenoviridae, Género Aviadenovirus), particularmente los que infectan a Gallus domesticus (Fowl Aviadenovirus, FAdV), se clasifican en 5 especies (A–E) y 12 serotipos. Algunos están asociados a patologías de gran impacto económico como el Síndrome de Hepatitis-Hidropericardio (HHS) y Hepatitis con cuerpos de inclusión (IBH). Durante las últimas dos décadas se ha observado un incremento significativo de casos graves a nivel mundial. En Uruguay, en los últimos años se han detectado casos de estas patologías en planteles comerciales.
En este marco, nos planteamos el objetivo de implementar metodologías de diagnóstico molecular para la detección y caracterización genética de adenovirus aviares circulantes en Uruguay, con el fin de comprender su diversidad genética y patrones de circulación en el país.
Se implementaron técnicas de diagnóstico molecular utilizando cebadores específicos que amplifican una región informativa del gen hexon, permitiendo la diferenciación de las cinco especies mediante análisis filogenéticos. Adicionalmente, se están poniendo a punto metodologías de secuenciación para la obtención de genomas completos (~45 kb).
Los resultados preliminares revelan la circulación de tres especies de adenovirus (C, D y E) en muestras uruguayas analizadas. Actualmente se está ampliando el número de muestras procesadas para obtener mayor representatividad de la diversidad viral en el territorio nacional.
Los estudios realizados confirman la presencia de múltiples especies de adenovirus circulando en Uruguay. Esta información contribuirá al desarrollo de estrategias de control efectivas y adecuadas a la realidad nacional.