Congreso Uruguayo en Una Salud - I Jornada Académica del Instituto de Investigación Una Salud

La replicación del virus SARS-CoV-2 depende de la actividad de sus proteasas virales MPro y PLPro. Por ello, se consideran atractivos para el desarrollo de fármacos contra la COVID-19. Estudios previos permitieron desarrollar y optimizar un modelo computacional para la identificación de compuestos inhibidores de MPro. Esta campaña de tamizaje tuvo una tasa de hit del 20% y dio lugar a la identificación de inhibidores de MPro con gran diversidad química y probada actividad antiviral [1,2]. El presente trabajo se orientó a completar el cribado contra MPro de la quimioteca local de manera “no sesgada”, y a evaluar la actividad cruzada contra PLPro de los compuestos hits, así como su citotoxicidad y actividad antiviral.
Para ello, MPro y PLPro se expresaron y purificaron de forma recombinante en E. coli. Se emplearon pseudo-sustratos fluorescentes para monitorear la actividad de las enzimas. Veintiún de los 491 compuestos cribados resultaron "hits" de MPro (inhibición ≥50% a 25 µM). Este tamizaje “a ciegas” arrojó una tasa de “hit” del 4%, significativamente inferior a la obtenida por los cribados asistidos por predicciones computacionales. Solo 4 de esos hits fueron citotóxicos contra células de pulmón humano (A549) y dos reprimieron la replicación de SARS-CoV-2 en células Vero. El contra-cribado frente a PLPro de la mejor familia química reveló una mayor selectividad de los compuestos hacia MPro.
Estos resultados experimentales permitirán refinar el modelo computacional inicial y mejorar su poder predictivo. El conocimiento generado (algoritmos de búsqueda) podrá ser aplicado a campañas de “screening” contra otros blancos virales.

[1] Prada Gori DN et al. Drug repurposing screening validated by experimental assays identifies two clinical drugs targeting SARS-CoV-2 main protease. Front. Drug. Discov. 2:1082065.
[2] Ruatta SM et al. Garbage in, garbage out: how reliable training data improved a virtual screening approach against SARS-CoV-2 MPro. Front. Pharmacol. 14:1193282.