Congreso Uruguayo en Una Salud - I Jornada Académica del Instituto de Investigación Una Salud

Los lipoperóxidos (LOOH) son especies inestables formadas por la oxidación incompleta de ácidos grasos poliinsaturados presentes en los fosfolípidos de membranas celulares. Su acumulación excesiva se asocia con el desarrollo y progresión de diversas patologías, incluidas las hepáticas. Para su detección en tiempo real, en nuestro laboratorio se desarrolló y caracterizó un biosensor fluorescente genéticamente codificado y redox sensible, capaz de monitorear de manera no invasiva y dinámica los niveles de LOOH en citosol, mitocondria y núcleo celular, tanto en modelos parasitarios como en hepatocitos humanos HepG2.
El objetivo de este trabajo fue generar y caracterizar líneas celulares de expresión estable del biosensor en hepatocitos humanos (HepG2) y evaluar la magnitud de la lipoperoxidación bajo un estado patológico de esteatosis hepática. Para ello, las secuencias codificantes del biosensor, previamente clonadas en vectores de expresión transitoria, fueron subclonadas en vectores pLenti y utilizadas para la generación de líneas celulares mediante infección con partículas lentivirales y posterior selección con antibióticos. La expresión estable del biosensor en las distintas regiones subcelulares se confirmó mediante microscopía de epifluorescencia, confocal y citometría de flujo.
Todas las líneas celulares respondieron al tratamiento con hidroperóxido de cumeno, validando su funcionalidad frente a un estímulo desencadenante de lipoperoxidación. Posteriormente, se evaluó su comportamiento en un modelo de hígado graso inducido por pretratamiento con ácidos grasos (palmítico y oleico), observándose una respuesta dependiente del tiempo de exposición.
En conjunto, estas líneas celulares constituyen una plataforma robusta para estudiar la formación dinámica y en tiempo real de lipoperóxidos en condiciones fisiopatológicas, representando una herramienta estratégica para el cribado de moléculas con potencial efecto hepatoprotector, con aporte al desarrollo de nuevas terapias dirigidas a enfermedades hepáticas.