Congreso Uruguayo en Una Salud - I Jornada Académica del Instituto de Investigación Una Salud

El descubrimiento de técnicas de estudios in vitro de la viabilidad celular son de gran relevancia para cuantificar el efecto biológico de compuestos químicos. En el campo de la leishmaniasis, la lectura de viabilidad celular en modelos in vitro por contaje directo en el microscopio óptico, representa el estándar dorado , sin embargo es altamente tedioso y envuelve un alto error asociado a percepción del analista y una alta toma de muestra para conteo. Por su parte, el ensayo colorimétrico utilizando bromuro de 3-(4,5-dimetil-tiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium (MTT) y el ensayo fluorométrico utilizando 7-hidroxi-3H-fenoxazin-3-ona-10-óxido 7-hidroxi-3H-fenoxazin-3-ona-10-óxido (resazurina) 1-4, envuelven el uso de reactivos tóxicos y costosos, un equipamiento particular y un requerimiento adicional en tiempo. En el presente trabajo, se desarrolló un protocolo simple y rápido para lectura de viabilidad celular in vitro basada en la turbidez (medida a 600 nm) del cultivo axénico del estadio promastigote de Leishmania infantum en el día cero y el día 5. Este tipo de protocolo ha sido exitosamente aplicado por nuestro grupo para determinar la viabilidad celular del estadio epimastigote de T. cruzi como función del incremento de la turbidez en el tiempo.5 En esta investigación, la lectura de promastigote de L. infantum fue optimizada directamente en placas de 96 pocillos, utilizando la misma placa la lectura en los días cero y cinco y leídos en un mismo paso utilizando VarioskanTM LUX Multimode Microplate Reader (Thermo Fisher SCIENTIFIC). El estudio fue validado utilizando varios fármacos leishmanicidas de referencias (glucantime, anfotericina, miltefosina) y otros agentes tripanosomicidas. Además, se han comparado los resultados con aquellos obtenidos del ensayo colorimétrico de MTT y fluorométrico de resazurina. Se estudió una variedad de concentraciones y réplicas biológicas (placas independientes). El protocolo generó resultados consistentes y en similar rango de trabajo que aquellos obtenidos de los ensayos MTT y resazurina, emergiendo como un método simple, rápido y económico para la lectura de viabilidad celular de promastigote.
Agradecimiento: CSIC I+D 2024 (22520240100580UD).
Referencias
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